作为生命的主要承担者,蛋白一直是科研项目中备受关注的一员。在生命体中,蛋白一直都不是单一运作的,往往需要很多蛋白共同配合来完场一个动作。这个时候,人们就提出了一个新的理念:蛋白互作。现阶段的蛋白互作技术您了解多少?下面,普健生物和大家具体聊聊。
什么是蛋白互作?
蛋白互作(PPls)其实就是一相细胞的基础事件,他发生在细胞结构和细胞器的每一个生理过程中,蛋白之间的配合、作用,最终完成细胞所需的一次生理周期过程。
蛋白互作分析的意义?
蛋白互作分析能够阐明蛋白质的相互作用在何时、何地发生以及蛋白质复合物如何形成为确定蛋白质生物学功能提供了重要基础。可以说,通过这项技术,我们能够更好地对细胞进行研究,以便于进一步了解生命。
那么,蛋白互作分析的方法有哪些呢?
就目前而言,常用的蛋白互作分析方法主要有四种,具体如下:
1、亲和纯化及免疫共沉淀
免疫共沉淀技术简称COIP技术,是通过抗原抗体之间的特异性结合原理完成,通过在细胞裂解液中添加特异性抗体,使得抗原和抗体形成沉淀,而后在通过复合物观察并验证抗原与其他蛋白之间相互作用的方法;
这个方法能真实检测体内的生理情况,实验条件温和,并且可以分离到天然状态的蛋白化合物。但是对于那些结合力弱的蛋白来说,效果就显得差强人意了;
2、Pull Down
Pull-Down技术,其实就是利用相对固化并且标记过后的标签蛋白从细胞裂解液中钓出与之相对应的蛋白的方法。而后通过对那些被“钓”出来蛋白进行研究,从而确定蛋白之间相互作用的关系。
3、双分子荧光互补
双分子荧光互补技术指的是通过将荧光蛋白的多肽链在不保守的氨基酸处切开,形成两个多肽片段,而后将这两个多肽片段分别链接到一对能发生互补作用的目标蛋白上。当这两个蛋白相互作用时,会造成两个分开的荧光蛋白互补,从而发出荧光;
4、酵母双杂交实验
酵母双杂系统是当前使用最为广泛的一种方法,它通过将靶蛋白和诱导蛋白特异性结合,诱饵蛋白结合于报道基因的启动子,启动报道基因在酵母细胞内的表达,如果检测到报道基因的表达产物,则说明两者之间有相互作用,反之则两者之间没有相互作用;
这四种方法各具特色,适合于不同的使用环境,我们在进行相关实验的时候,可以结合当前的情况选择最适合的方法。武汉普健生物专业为广大用户提供蛋白抗体表达服务,如果您有相关需求,欢迎来电咨询。